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    蛋白双向 电泳实验服务
    蛋白双向 电泳实验服务
    更新时间:2021-02-19
    访问量: 732
    厂商性质: 生产厂家

    蛋白双向 电泳实验服务
    提供商: 上海研谨生物
    服务名称: 蛋白双向2D-WB电泳实验服务
    规格: 实验服务
    价格: 500元
    收费标准/服务周期/提供结果:
    欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
    更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电详询!

    蛋白双向 电泳实验服务产品概述:

     

    一、蛋白双向 电泳实验服务实验技术简介

    2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程 为抗原蛋白混合物先经双向电泳分离,然后将凝胶蛋白转印至支持膜上,再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化,在蛋白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱鉴定技术,可以从蛋白混合物中找到免疫原性更强的抗原。

    二、蛋白双向 电泳实验服务概述

    2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程 为抗原蛋白混合物先经双向电泳分离,然后将凝胶蛋白转印至支持膜上,再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化,在蛋白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱鉴定技术,可以从蛋白混合物中找到免疫原性更强的抗原。

    三、服务内容

    1、蛋白质抽提与定量;

    2、双向电泳;

    3、转膜,封闭,孵育,显示成像。

    四、实验操作流程

    1、第--项电泳(IEF) ,胶条平衡,第二项电泳SDS-APGE.

    2、第二项电泳结束后,取出凝胶进行转膜,转膜方法可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

    3、封闭,5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时(室温)或过夜(4度)。

    4、一抗孵育,根据抗体说明书选择孵育时间,常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜,一抗孵育后取出膜

    TBST洗涤3次,每次5分钟。

    5、二抗孵育:根据一抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。

    6、显影:将A、B底物按比例稀释混台均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光时间需综台考虑蛋白质的上样量,抗体稀释浓度,抗体孵育时间等因素。

    7、定影后,清洗胶片,晾干,标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。

    送样须知,为了保证2D Western blot技术服务能顺利进行,样品寄送需满足以下要求:

    1、顾客提供:组织、细胞、蛋白质溶液等; 一抗(可交由研谨公司代购)。

    2、运输要求:干冰或液氮包装寄送。

    注:样本应避免各类污染和反复冻融。

    五、技术服务报告内容

    1、蛋白质定量结果及电泳上样量;

    2、原始胶片、电子图片及图片分析结果;

    3、2D Western blot完整的实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。

    附: 2D Western blot实验步骤

    1、2D Western blot蛋白质样本制备,制备的主要原则是尽可能溶解全部蛋白质,破坏蛋白质与蛋白质间的相互作用,避免各类干扰物质,样品制备与IEF兼容等。

    2、双向电泳的主要步骤,第-项电(IEF) ,胶条平衡,第二项电泳SDS-APGE.

    3、第二项电泳结束后,取出凝胶进行转膜,转膜方法可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

    4、封闭, 5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时(室温)或过夜(4度)。

    5、-抗孵育,根据抗体说明书选择孵育时间,常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。

    6、二抗孵育:根据-抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。

    7、显影:将A、B底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光时间需综合考虑蛋白质的.上样量,抗体稀释浓度,抗体孵育时间等因素。

    8、定影后,清洗胶片,晾干,标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。

     

    实验代做服务:

     

    免疫组化IHC染色实验服务

    细胞、组织TUNEL凋亡染色实验服务

    试剂盒免费代检测

    实验室代做实验项目

     

    透射电镜服务实验服务

    石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡

    核仁组成区嗜银-AGNOR染色实验服务

    免疫共沉淀(CHIRP)实验

    RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验代做

    酶联免疫(ELISA)技术服务

    鸡传染性法氏囊病病毒VP2抗体诊断试剂盒

    喹诺酮类快速检测试剂盒

    组织芯片/微阵列定制技术服务

     

    染色质免疫沉淀分析(CLIP)实验服务

     

    多因子液相芯片技术(Luminex)实验

    免疫细胞化学ICC实验服务

    ATP/ADP检测实验服务

    蛋白双向(2-D)电泳实验服务

    蛋白相互作用分析

    碱性磷酸酶染色实验服务

    PKC活性检测实验

    非标定量实验

    (Label-free)

     

    DIGE技术实验服务

    端粒酶活性检测实验

    细胞生长曲线的测定

    扫描电镜服务

    NF-KB p65活性检测实验

     

    慢病毒包装实验服务

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