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    玉米赤霉烯酮(ZEN)ELISA检测试剂盒使用说明书

    提 供 商: 上海研谨生物科技有限公司 资料大小:
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    详细介绍

    本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断

    玉米赤霉烯酮ZENELISA检测试剂盒

    使用说明书

    检测原理

    试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包玉米赤霉烯酮的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的竞争抗原,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的玉米赤霉烯酮(ZEN)相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

    样品收集、处理及保存方法

    1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

    2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

    3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

    4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

    5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

    自备物品

    1.酶标仪(450nm)

    2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

    3.37℃恒温箱

    操作注意事项

    1.   试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

    2.   实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

    3.   按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。

    4.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

    5.   所有液体组分使用前充分摇匀。

    试剂盒组成

    名称

    96孔配置

    48孔配置

    备注

    微孔酶标板

    12孔×8条

    12孔×4条

    标准品

    0.3mL*6管

    0.3mL*6管

    样本稀释液

    6mL

    3mL

    竞争抗原-HRP

    6mL

    3mL

    20×洗涤缓冲液

    25mL

    15mL

    按说明书进行稀释

    底物A

    6mL

    3mL

    底物B

    6mL

    3mL

    终止液

    6mL

    3mL

    封板膜

    2张

    2张

    说明书

    1份

    1份

    自封袋

    1个

    1个

    注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、1.5361224 PPb

    试剂的准备

     20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

    洗板方法

    1.   手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

    2.   自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

    操作步骤

    1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

    2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

    3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。

    4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的竞争抗原50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

    5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

    6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

    结果判断

    1.  15分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;

    2.  百分结合率计算:设S0管计数为B0,各标准管或样品管计数为B,非特异管计数为NSB,则百分结合率计算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%

    3.  logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)

    4.  将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除,为标准点的百分结合率,在log-logit坐标纸上绘图。

    5.  Log-logit双对数标准曲线:坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位,第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。坐标纸纵轴为百分比(1-99),即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上,同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率,再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点,此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度,无须换算。

    6.  人工处理:以标准浓度取log值为横坐标,对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标,对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线(理想化时是一条直线)。根据待测样

    品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸,查出的数值应取反对数才是最后的浓度值。

    7.  自动处理:使用logit-log或四参数数据处理模式,由电脑自动计算得出结果。

    8.  敏感度:1.0 PPb

    9.  图例

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    试剂盒性能

    1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

    2.  灵敏度:最DI检测浓度小于0.1 PPb

    3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

    4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

    5.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

    6.  有效期:6个月

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